做ELISA标准曲线时需注意哪些细节问题?
用于免疫检测的所谓“标准曲线”其实称为拟合曲线比较合适。ELISA标准曲线做的好与坏会直接影响到实验的结果,甚至是关系到实验的成败。所以在做ELISA标准曲线时需要重点注意一些细节问题。
1、设置标准曲线样品的标准浓度范围要有一个比较大的跨度,并且要能涵盖所要检测实验样品的浓度,即样品的浓度要在标准曲线浓度范围之内,包括上限和下限。而对于呈S型的标准曲线,尽量要使实验样品的浓度在中间坡度陡段,即曲线几乎成直线的范围内。
2、检测标准样品时,应按浓度递增顺序进行,以减少高浓度对低浓度的影响,提高准确性。
3、标准曲线的样品数一般为7个点,但至少要保证有5个点。
4、做出的标准曲线相关系数因实验要求不同而有所变动,但一般来说,相关系数R至少要大于0.98,对于有些实验,至少要0.99甚至是0.999。
5、样品的浓度等指标是根据标准曲线计算出来的,所以首先要把做标准曲线看作是比做正式实验还要重要的一件事,否则后面的实验结果无从谈起。
6、采用倍比稀释法配制标准曲线中的标准样品浓度,这样就能够保证标准样品的浓度不会出现较大的偏离。
所以说,为了不影响实验结果的准确性,在做ELISA标准曲线时一定要多注意这些细节问题。
ELISA试剂盒上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦东新区。是一家专门从事生物技术相关产品,励志研发和销售的综合性生物公司,产品远销多个国家和地区,我们将一如既往地秉承“一切为了满足客户的需求"的经营宗旨;牢固树立“以客户需求为准则、以市场需求为导向,不断开发高质量的新产品,提供客户满意的综合服务质量"的方针。