Elisa课堂：ELISA的原理、类型及选择

  ELISA的原理、类型及选择

  ELISA是酶联接免疫吸附剂测定( Enzyme-linked Immunosorbnent Assay )的简称。是继免疫荧光和放射免疫技术之后发展起来的一种免疫酶技术。该技术自70年代初问世后迅速应用于生物学和医学科学的许多领域。

  ELISA的原理，这一块相信小伙伴们都是非常熟悉的了，是以免疫学反应为基础，将抗原、抗体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相结合起来的一种敏感性很高的试验技术。由于抗原、抗体的反应在一种固相载体──聚苯乙烯微量滴定板的孔(当然就是我们熟知的96孔板啦)中进行，每加入一种试剂孵育后，可通过洗涤除去多余的游离反应物，从而保证试验结果的特异性与稳定性。在实际应用中，通过不同的设计，具体的方法步骤可有多种。即：用于检测抗体的间接法、用于检测抗原的双抗体夹心法以及用于检测小分子抗原或半抗原的抗原竞争法等等。

  01 直接法原理

  直接法是利用包被抗原，检测抗体或者进行重组蛋白的活性验证，利用蛋白与板材(即微孔板底)通过疏水键、流水/离子键的被动吸附,通过引入其它活性基团如氨基和碳基的共价结合，以及通过表面改性后的亲水键结合等等，当然也有利用亲和素预包被的板材，通过亲和素与生物s的共价结合及亲和素有四个残基理论可结合个生物s的特性，使结合的蛋白多，灵敏度进一步提高，目前只是该方法的成本会升高。

  直接法相对来说灵敏度和特异性较其他方法低，目前使用较少，通常用于重组蛋白或重组抗体的结合活性验证。而使用亲和素包被的板材主要原因在于大分子蛋白质较小分子蛋白质通常含有多的疏水基团，故易吸附到固相载体表面。蛋白质与聚苯乙烯固相载体是通过物理吸附结合的，靠的是蛋白质分子结构上的疏水基团与固相载体表面的疏水基团间的作用，当然好的板材也是成功的一半，聚苯乙烯具有较强的吸附蛋白质的性能。各方面表现较为均衡，是ELISA 反应中的固相载体。小分子蛋白由于吸附性较差，固使用这样间接包被的形式才能起到理想的固定形式。

  02间接法原理

  间接法相对直接法，灵敏度进一步提升，利用一抗与抗原的特异结合，再加入通用二抗(即检测抗体)，如一抗使用的抗某蛋白的鼠抗，二抗可使用鼠/兔等抗该类型抗体(IgG)的抗体，利用抗体的特异性识别，加之显色用的二抗非直接与抗原结合，所以称之为间接检测，该方法一般用于抗体的检测，如重组抗体，或疫苗效价的检测，咱们打疫苗的目的就是产生中和抗体嘛，该方法在IVD企业使用较多。