如何排除ELISA试剂盒“边缘效应”

  如何排除ELISA试剂盒“边缘效应”

  我们在使用ELISA试剂盒的实验测定的时候，常发现有“边缘效应”，也就是外周孔显色较中心孔深。经研究证实在温育中的热力学梯度可能是根本原因之所。聚苯乙烯本身为不良热导体，在实验室的常规ELISA测定中，将板从室温(通常在25℃左右)置于37℃温箱，板也升温时，在外周孔与中心孔之间可能存在一热力学梯度。因此使用水浴或在将反应溶液加入至板孔中时，将板和溶液均加热至温育温度(如37℃)，就可以很容易地排除“边缘效应”，并且可提高测定的重复性。

  1. 避免直接接触终止液和底物A、B。一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。

  2. 实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。

  3. 不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。

  4. 试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。

  5. 实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。

  6. 不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。

  7. 使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。

  8. 使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里。

  9. 洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。

  10. 底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。

  11. 加入试剂的顺序应一致，保证所有反应板孔温育的时间一样。

  12. 按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。

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