Trizol提取RNA的详细步骤？

  Trizol提取RNA的详细步骤

  1、在提取组织RNA时，每50～100mg组织用1ml Trizol试剂对组织进行裂解;提取细胞RNA时，先离心沉淀细胞，每5-10╳106个细胞加1ml Trizol后，反复用枪吹打或剧烈振荡以裂解细胞。

  2、将组织或细胞的Trizol裂解液转入EP管中,在室温15~30C下放置5分钟;在EP管中，按照每1mlTRIZOL加0.2ml氯/仿的量加入氯/仿，盖上EP管盖子，在手中用力震荡15秒，在室温下(15℃～30℃)放置2～3分钟后，12000g(2℃～8℃)离心15分钟。

  3、取上层水相置于新EP管中,按照每1mlTRIZOL加0.5ml异丙醇的量加入异丙醇，在室温下(15℃～30℃)放置10分钟,12000g(2℃～8℃)离心10分钟。

  4、按照每1mlTRIZOL加1ml 75%乙醇进行洗涤，涡旋混合，7500g(2℃～8℃)离心5分钟，弃上清;让沉淀的RNA在室温下自然干燥;用Rnase-freewater溶解RNA沉淀。

  Ps:在收集到生物材料之后，好马上进行RNA制备工作。若需暂时储存，则应以液氮将生物材料急速冷冻后，储存于-80℃冷冻柜。在制备RNA时，将储存于冷冻柜的材料取出，立即以加入液氮研磨的方式打破细胞，不可以先行解冻，以避免RNase的作用。

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