古朵简述:ELISA试剂盒三大特点与步骤?
ELISA试剂盒特点:
一、特异性
ELISA试剂盒的特异性与试剂盒的要害组分,抗体对有关。若抗体对中为多抗,另一个有必要为单抗,建议运用双单抗。挑选一个好的ELISA试剂盒,咱们首先要考虑的就是特异性。
二、灵敏度
ELISA试剂盒的好坏往往就取决于灵明度的高低,因而灵敏度也是咱们挑选ELISA试剂盒的一个重要技术参数。灵敏度反映的是试剂盒检出被检物质的量的才能,用户可根据自己样本中待检目标的量挑选合适的试剂盒,假如待检目标量很低,一般的试剂盒不能满足要求,可挑选高敏的ELISA试剂盒。
三、重复性
科学实验讲究重复性,一般 ELISA试剂盒,其板内和板间变异系数应该控制在 15% 以内。
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ELISA试剂盒操作步骤:
1. 跟着病况的进展或由其他因素影响,某些抗体在机体内的含量发作大幅动摇,因此有必要对标本进行预处理。间接法测定中,标本恰当稀释还可下降非特异性反响。
2. 加样一般运用加液器,在ELISA试剂盒中一般有4次加样:加标本、加酶结合物、加底物和加间断液。加标本时有必要每份标本运用一支移液器吸嘴,避免交叉污染。加酶结合物、底物和间断液时则不需换吸嘴。
3.在成批手艺检测中,还应留神操作时差的影响。加样及混匀时间的差异,使抗原抗体反响和酶促反响时间不一致,对竞争法及定量检测影响很大,不留神可能会导致过错效果或定量不准。
4. 洗刷是ELISA试剂盒操作过程中决议实验胜败的一个关键步骤。目的是除掉未结合的免疫反响物,间断抗原抗体反响,除掉标本中与反响无关的成分、游离的酶标物以及反响过程中吸附于固相载体上的非特异性物质。
5. 断定效果须运用ELISA试剂盒测读仪,比色法判读可选择单波长或双波长,根据反响液颜色的不同选用不同波长的滤光片,以空白孔校零测定反响孔的吸光度值。酶标仪具有杰出的重复性。
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