实验小知识——ELISA实验“花板”了怎么办?

  实验小知识——ELISA实验“花板”了怎么办?

  酶联免疫的原理是抗原或者抗体的固相化及抗原抗体的酶标记，加入酶反应底物后，底物被*催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，由此进行定量或定性的分析。实验的特异性和灵敏度较高，操作也简单，可大批量操作而广泛应用于多种传染病的筛查。然而，由于「花板」现象的出现，会给实验结果的判读和分析带来麻烦。「花板」，就是空白、阳性、阴性对照及室内质控孔结果正常，而样本孔的 OD 值偏高，弱阳性的结果偏多。以下，是关于花板原因的一些分析。

  1、花板的原因大多在在样本花板，就是空白、阴阳性对照及室内质控空结果正常，而样本孔 OD 值偏高。之所以空白、对照及质控孔的结果正常而样本孔的结果异常,是因为样本本身的原因，大部分或者全部的样本孔的 OD 值偏高，很可能是因为样品中某些共有的物质非特异性的吸附于固相载体，而在实验过程中并未除去。

  2、洗涤的作用聚苯烯因其具有较强的吸附蛋白质的性能而被广泛用于 Elisa 实验的固相载体，聚苯烯塑料对蛋白质的吸附作用是具有普遍性，因此需要通过洗涤排除在实验过程中的非特异性地吸附在固相载体上的干扰物质。

  3、孵育时间过长也会造成花板现象样本过多会导致样本在室温停留时间增多，进而加长了孵育的时间，蛋白质非特异性吸附于固相载体。

  为了避免“花板"问题的出现，降低检测的假阳性率，获得理想的实验结果，在检测过程中应采取下列措施：

  1.在选择ELISA试剂时，应选择灵敏度高、特异性好、稳定性好、批间差小、操作方便、省时的试剂,如恒远生物高敏elisa试剂盒。

  2.在所有标本进行检测的过程中，所用的仪器及加样过程都处于正常状态的情况下，步骤均按照各种试剂说明书的要求去做，排除实验所用仪器和操作步骤对实验结果的影响。

  3.血液标本应置于室温下1-2h，使血液凝固收缩，然后离心检测或让血液过夜后再检测。这样才能使得血液充分收缩，让标本中的非特异性物质所致的假阳性率降至低。

  4.检测加大离心转速，尽量延长时间，使血细胞和纤维蛋白充分沉淀，让血细胞与血清*分离。

  5.加样时不能加入红细胞或纤维蛋白，要按照操作说明书去做，否则会影响实验结果。

  6.对于血清中存在的红细胞或纤维蛋白原，可以在加样离心时得到控制，同样也可以通过适当增加洗涤次数和浸泡时间来进步减轻或避免对实验结果的影响。同样，对于血液存在的非特异性的IgG，增加洗涤次数和延长浸泡时间也同样有效。

  7.封板温育时，各孔定要封严，防止阳性标本的液体蒸发，产生周边现象从而导致“花板"的出现。

  8.孵育时间过长，增加了固相载体吸附非特异性蛋白的可能性，也会造成“花板"。因此，除把握孵育时间外，在加样过程中也应严格控制时间，标本较多时可分批操作。

  9.手工洗板时应注意液体被溅出或孔与孔之间的液体溢出，连成整体液面后产生“花板"。

  10.用洗板机洗板时应防止针口有纤维蛋白或异物，这些异物在洗板的过程中易产生拖带现象而导致“花板"的出现。

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