小鼠丙二醛(MDA)试剂盒新手操作方法？

  小鼠丙二醛(MDA)试剂盒新手操作方法

  小鼠丙二醛(MDA)试剂盒检测范围：

  0.3nmol/L -8 nmol/L使用目的：本试剂盒用于测定小鼠血清，血浆及相关液体样本中丙二醛(MDA)含量。实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠丙二醛(MDA)水平。用纯化的小鼠丙二醛(MDA)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入丙二醛(MDA)，再与HRP标记的丙二醛(MDA)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过*洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的丙二醛(MDA)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值)，通过标准曲线计算样品中小鼠丙二醛(MDA)浓度。

  标本要求 1.标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2.不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。操作步骤标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

  加样：分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl(样品终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

  温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

  配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。

  温育：操作同3。

  洗涤：操作同5。显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10分钟.

  终止：每孔加终止液50μl，终止反应(此时蓝色立转黄色)。

  测定：以空白孔调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

  小鼠丙二醛(MDA)试剂盒注意事项：

  1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。

  2.浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。

  3.各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。请每次测定的同时做标准曲线，好做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔孔的OD值)，请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定，计算时请后乘以总稀释倍数(×n×5)。封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。6.底物请避光保存。7.严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

  8.所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

  9.本试剂不同批号组分不得混用。

  保存条件及有效期 1.试剂盒保存：2-8℃ 2.有效期：6个月

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