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辛基-琼脂糖凝胶 CL-4B操作步骤?

已关闭 悬赏分:0 - 提问时间 2023-04-20 15:10

  辛基-琼脂糖凝胶 CL-4B操作步骤

  1.乙醇浸泡:在室温下,将干粉浸泡于50-60%乙醇中至少24小时,并不断搅拌以保证凝胶溶胀,用无盐水洗去残存的乙醇滤干;

  2.无盐水浸泡:室温下,在无盐水中充分溶胀24小时,间隙搅拌,以保证凝胶的*溶胀,然后;

  3.盐酸浸泡:在常温下再用0.2NHCl浸泡12小时,间隙搅拌,滤干,水洗只中性;

  4.将溶胀好的凝胶脱气后(真空抽滤或超声波)根据装柱要求一次性置入柱内,注意保持湿态装柱,并避免柱内产生气泡或断层;

  5.上样前平衡层析柱至少3-5个柱体积直到记录仪基线变得平稳为止(流出液的PH值等于上柱的Buffer的PH值);

  6.凝胶过滤的上样量一般为5%的柱床体积,我们建议初次上样控制在1-2%的床体积,视分离情况可以调整;脱盐时上样量可以达到20%的柱床体积,柱高的选择也与分离要求相关,柱高控制在40-50cm以下,过高的凝胶层会引起较大的反压,应当尽可能避免。难分离物质要有一定柱高和流速控制,脱盐时高径比为5:1即可;

  7.洗脱方法:可以用无盐水,也可以采用上柱时的缓冲液洗脱;在上柱Buffer中加入NaCl等梯度洗脱或盐梯度洗脱也可以*分离纯化;

  8.在位清洗(CIP)凝胶使用十次后作一次CIP,目的是去除柱床内沉淀的及顽固残留的蛋白。方法是以40cm/h用1M氢氧化钠反向洗四个柱体积,再以至少三个柱体积平衡缓冲液再生。

  辛基-琼脂糖凝胶 CL-4B操作注意事项

  1、密封贮存于4°C-28°C(保存溶液为20%乙醇),通风、干燥的地方,不能冷冻;用过的柱子贮存于4°C(20%乙醇)。

  2、在装柱、使用和保存柱子的时候,要避免柱子流干,气泡进入。

  3、在实验过程中,请严格遵循产品说明书上的要求进行操作。

  4、本产品避免与氧化剂接触;避免长时间暴露在空气中。

  5、保质期:5年。

  辛基-琼脂糖凝胶 CL-4B 上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦东新区。是一家专门从事生物技术相关产品,励志研发和销售的综合性生物公司,产品远销多个国家和地区,我们将一如既往地秉承“一切为了满足客户的需求"的经营宗旨;牢固树立“以客户需求为准则、以市场需求为导向,不断开发高质量的新产品,提供客户满意的综合服务质量"的方针。

450 次关注     提问者: fanke001  


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