溶解多肽的方法及多肽应用的注意点

  溶解多肽的方法及多肽应用的注意点

  多肽的溶解度取决元计算的物理特性。氨基酸可分类为酸性，碱性，极性，非极性，疏水性。多肽有高含量的非极性疏水性氨基酸或极性不带电荷的氨基酸。建议溶解在有机溶液中(例如：DMF，甲醇，丙醇，异丙醇，DMSO)。总之，酸性多肽一般溶解于碱性溶液中，而碱性多肽溶解在酸性溶液中。

  氨基酸的属性

  碱性：Arg,His(H),Lys(K)

  非极性疏水性：Ala(A),Ile(I)，Len(L),Met(M),Phe(F),Pro(P),Trp(W),Val(V)

  极性不带电荷：Asn(N),Cys(C),Glg(G),Gln(Q),Ser(S),Thr(T),Tyr(Y)

  酸性：Asp(D),Glu(E)

  由于多肽的溶解特性取决于其氨基酸成分。在选择适当的溶剂之前我们建议先查一下多肽的氨基酸序列，

  1、 碱性多肽(碱性氨基酸数量>酸性氨基酸数量)应该先用小量酸性氨基酸溶液(例如：醋酸或三氟醋酸)溶解，然后稀释剂所需的浓度。制备高浓度的储存液时，应用80%醋酸溶解多肽。也可用20%醋酸溶解减少醋酸对于检测系统的不良影响。

  2、 酸性多肽(酸性氨基酸数量>碱性氨基酸数量)应该先用小量碱性氨基酸溶液(例如0.1%氨水，NH4OH),然后用水稀释到所需的浓度。应该注意，对于含有半胱an酸(Cysteine)的多肽要避免使用氨水，因为在PH碱性条件下会促使二硫键的形成。

  3、 中性或者高度疏水性多肽，含有许多极性不带电荷的氨基酸或非极性疏水性氨基酸，应该用小量的有机溶剂(例如：DMF，甲醇，丙醇，异丙醇，DMSO)溶解，因为DMSO可形成氨基酸甲风化。

  4、 离液剂(例如尿素，盐酸胍)有时用来溶解凝聚的多肽，但如有可能应当尽量不用，因为离液剂会干扰多肽的生物学应用。在个别情况下，多肽的溶解时间较长，甚至达几个小时，在水浴中超声波打几分钟可促使大颗粒多肽的溶解。但是不要加度加热。含有Trp,Met,Cys的多肽要额外小心避免氧化，应该用无氧的水或还原剂(例如DTT)来溶解。储藏时，多肽溶液应该分装后置于-15℃，可以保持稳定几个月，含有Trp,Met,Cys的多肽半衰期较短，不宜长期保存。

  多肽在溶解和储存时，应遵循下列要点：

  1、 多肽的净重

  在准备多肽的溶液时，应考虑到多肽的净重问题。研究用多肽的HPLC纯度一般达到95%以上，而多肽的固体含量在70-90%范围内，这是因为多肽含有的其它离子(例如：醋酸/三氟yi酸)和残余的潮气。每个批号的多肽含量都记录在分析数据报告上。

  2、 多肽冻干粉的处置

  *多肽长期保存应放置在-15℃以下。

  *多肽容易吸潮，应先把装有多肽的瓶放在玻璃器中，至于室温下平衡温度，然后才能打开瓶称量多肽，多肽吸收水分后将影响稳定性使多肽含量减少。

  *从瓶中称出所需量的多肽后，应立刻将瓶盖拧紧。

  3、溶解于储存

  *多肽应溶解在适当的溶液中：酸性多肽应溶解在碱性溶液中，碱性多肽应溶解在酸性溶液中。必要时可用超声波帮助溶解。

  *多肽含有Trp,Net,Cys应该特别注意免氧化.应该用无氧的水或还原剂.

  *储存时,多肽溶液应该分装后置于-15℃以下,多数含有Trp,Net,Cys的多肽半帅期教短,不应长期保存。

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