琼脂糖凝胶电泳缓冲液配制有哪几点？

  琼脂糖凝胶电泳缓冲液配制有哪几点？

  琼脂糖凝胶具有网络结构，物质分子通过时会受到阻力，大分子物质在涌动时受到的阻力大，因此在凝胶电泳中，带电颗粒的分离不仅取决于净电荷的性质和数量，而且还取决于分子大小，这就大大提高了分辨能力。在琼脂糖凝胶电泳缓冲液又几种适用于天然双链DNA的电泳。

  琼脂糖凝胶电泳缓冲液配置

  TBE通常作为5×或10×的贮存液配制和贮存。这种浓的贮存液pH应为8.3左右，它在应用前稀释，并用同一种贮存液制备凝胶溶液和琼脂糖凝胶电泳缓冲液。

  上述三种电泳缓冲液都比较好用，三者中TAE的缓冲容量低，长时间电泳会被消耗。此时的凝胶的阳性一侧将发生酸性化，凝胶中向阳极迁移的溴酚蓝的颜色呈蓝紫色到黄色的变化，所以需要定期换缓冲液。

  琼脂糖凝胶电泳缓冲液配方注意事项

  a.TBE浓储存液长时间存放后会形成沉淀物，为避免这一问题，可在室温条件下用玻璃瓶保存5X溶液，出现沉淀后则予以废弃。以往都以lX作为使用液(即1：5稀释浓储存液)进行琼脂糖凝胶电泳。但0.5X的使用液已具备足够的缓冲容量。目前几乎所有的琼脂糖凝胶电泳都以1：1。

  稀释的储存液作为使用液。进行聚丙烯酰胺凝胶电泳使用的lXTBE，是琼脂糖凝胶电泳时使用液浓度的2倍。聚丙烯酰胺凝胶垂直槽的缓冲液槽较小，通过缓冲液的电流量通常较大，需要使用1XTBE以提供足够的缓冲容量

  b.碱性琼脂糖凝胶电泳缓冲液应现用现配

  在配制琼脂糖凝胶电泳缓冲液时，不论哪一种都需要加适量的EDTA，以除去2价金属离子。另外，硼酸与琼脂糖易形成复合物，使凝胶带负电荷，可能会吸附带正电荷的物质。

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