古朵教您如何正确使用生物素标记抗体及蛋白?

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  古朵教您如何正确使用生物素标记抗体及蛋白?

  生物素是一个分子量只有244.31Da的小分子，经活化后可与蛋白、抗体等生物大分子结合，不仅可以很好地保持大分子的生物活性，而且与亲和素结合使用时具有多级放大作用，使其广泛应用于微量抗原、抗体定性、定量检测及定位观察研究。

  那么如何使用生物素标记抗体或蛋白呢?下面古朵生物给大家分享一下。

  工具/原料

  1.10ul，50ul，200ul，1000ul可调移液器

  2. 恒温箱(37℃)

  3. 离心机(离心力可达到12,000×g)

  4. 生物素标记试剂盒(Cata.No:EBLK0002, Elabscience)

  古朵生物详解实验前准备

  1.仔细阅读使用说明书。

  2.计算待使用NH2-Reactive Biotin的量。

  3.提前20min从冰箱中取出试剂盒，平衡至室温(注：不需要用到的NH2-Reactive Biotin继续放置冰箱中)。

  4.溶解NH2-Reactive Biotin：加入30ulDMF至NH2-ReactiveBiotin瓶中，静置10min，待其充分溶解，此时生物素的浓度为10mM。

  操作步骤：(本操作步骤按照1mg的量进行标记)

  1.取1mg待标记抗体于Filtration tube中，并加入相应体积的Labeling Buffer，使抗体的终浓度为2mg/ml，12,000 x g离心10min。(注：①Filtration tube的大体积为0.5ml②待标记抗体浓度低时，可先超滤离心一次)

  2. 加入13.3ul NH2-Reactive Biotin 和适量Labeling Buffer至上述Filtration tube中，使终体积为0.5ml，并轻轻吹打混匀。放入37℃恒温箱中避光温育30min。12,000 x g离心10min。

  3. 加入适量Labeling Buffer至上述Filtration tube中，使终体积为0.5ml，并轻轻吹打混匀，12,000 x g离心10min。

  4. 操作3重复一次。

  5. 加0.2ml Labeling Buffer至Filtration tube中，轻轻吹打。将滤芯倒转放置于另一个离心管中，6,000 x g离心10min。

  6. 收集离心管中的溶液，即为生物素标记的抗体。

  古朵教您如何正确使用生物素标记抗体及蛋白? 上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦东新区。是一家专门从事生物技术相关产品，励志研发和销售的综合性生物公司，产品远销多个国家和地区，我们将一如既往地秉承“一切为了满足客户的需求”的经营宗旨;牢固树立“以客户需求为准则、以市场需求为导向，不断开发高质量的新产品，提供客户满意的综合服务质量”的方针。